标准氨基酸溶液 标准氨基酸溶液是什么

急求：离子交换柱层析分离氨基酸的讲义

一、目的

学习用阳离子交换树脂柱分离氦基酸的操作方法和基本原理.

二、原理

各种氨基酸分子的结构不同,在同一PH时与离子交换树脂的亲和力有差异,因此可依亲和力从小到大的顺序被洗脱液洗脱下来,达到分离的效果.

三、器材

1、20cmX 1cm层析管 2、试管

3、吸管． 4、恒压洗脱瓶

5、部分收集器 6、搪磁杯

7、电炉 8、分光光度计

四、试剂和材料

1、．苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸 lx 8,l00一200目,可用上海华东化工学院产品）

2 、2 mol／L盐酸溶液

3、2mol／L氢氧化钠溶液

4、标准氨基酸溶液 天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸均配制成 2 mg／mL的0.1M盐酸溶液.

5、混合氢基酸溶液将上述天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸溶液按1：2．5：10的比例混合.

6、柠檬酸－氢氧化钠一盐酸冲液（pH5.8）,钠离子浓度0 .45M）

取柠檬酸（C6O7H8.H20 ）14.25g、氢氧化钠9.30g和 浓盐酸 5．25 mL溶于少量水后,定容至 500 mL,冰箱保存.

7、显色剂 2 g水合茚三酮溶于 75mL乙二醇单甲醚中．加水至 100 mL.

8、50%乙醇水溶液

五、操作

1、层析柱的准备：将强酸型阳离子交换树脂用氢氧化钠处理成Na+型后洗至中性（处理方法见第三篇实验十二）．搅拌一小时后装成一个直径1cm．高 16～18 cm的层析柱.

2、氨基酸的洗脱：用P H5.8的柠檬酸缓冲液流洗平衡交换住（装置如图）.调节流速为 0.5 mL／min,流出液达床体积的4倍时即可上样.由柱上端仔细加人氨基酸混合液0．25—0．5 mL,同时开始收集流出液.当样品液弯月面靠近树脂顶端时,即刻加入0.5 mL拧檬酸缓冲液冲洗加样品处.待缓冲液弯月面靠近树脂顶端时.再加入0．5 mL缓冲液.如此重复两次,然后用滴管小心注入柠檬酸缓冲液（切勿搅动床面）,并将柱与洗脱瓶和部分收集器相连.开始用试管收集洗脱液,每管收集lmL．共收集60一80管.

3、氨基酸的鉴定：向各管收集液中加lmL水合茚三酮显色剂并混匀,在沸水浴中淮确加热15分钟后冷却至室温．再加15 mL的50％乙醇液.放置10分钟.以收集液第2管为空白,测定A570nm波长的光吸收值.以光吸收值为纵坐标,以柱洗脱体积为横坐标绘制洗脱曲线.以已知3种氨基酸的纯溶液为样品,按上述方法和条件分别操作,将得到的洗脱曲线与混合氨基酸的洗脱曲线对照．可确定3个峰的大致位置及各蜂为何种氨基酸.

测定植物中游离氨基酸总量实验中的“标准氨基酸”应该用什么氨基酸？

α-氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫化合物，在570nm有强吸收。谷氨酸也可以配标准氨基酸溶液，还是570nm下测OD值。

2.5%的酸性茚三酮显色液怎么配置

配置方法：

1，用双蒸水配制0.5mg•ml－1的标准氨基酸溶液50ml。

2，然后用0.5mg•ml－1的氨基酸溶液在25ml刻度试管中配置0mg•ml－1、0.1 mg•ml－1、0.2 mg•ml－1、0.3 mg•ml－1、0.4 mg•ml－1、0.5mg•ml－1溶液各1ml，加水补足至4ml。

3，然后加入2%茚三酮(取茚三酮0.1g，溶于25mL热水，加入氯化亚锡40mg后过滤，滤液置冷暗出过夜，定容至50mL)和缓冲液各1ml，摇匀，置沸水浴中加热15min，迅速冷却，定容。

4，静置15min，以试剂空白调零，测定各浓度AA溶液的吸光度值A570nm。