氨基酸的分析的三组检验方法?
1. 分光光度法氨基酸检测:主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应,产生蓝紫色化合物,该化合物在某一波长处有最大吸收峰,根据吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生剂为茚三酮。
2. 毛细管电泳法氨基酸检测:根据分离原理的不同,可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。其中,毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。
3. 近红外光谱法氨基酸检测:利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁,产生光谱的变化,结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。
4. 气相色谱法氨基酸检测:将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质,根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同,实现对氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色谱法氨基酸检测:是最常用的一种氨基酸检测方法。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应,因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质,衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
氨基酸液质分析 274是什么物质
液质流动相选甲醇和水体系是因为对于液相色谱而言,物质的分离是基于被测物在流动相和固定相间的分配比不同而获得的,不管是不是中性物质,只要它们在两相间的分配比不同就可以分离。而流动相的改变也不过是为了获取这个分配比的差异而已。
液质流动相的选择方法:
1、流动性主要看结构,极性大小,溶解性,对酸碱的敏感性等等。 大体上有机相是乙腈,甲醇,水相是甲酸水,乙酸水,甲醇水或者加点乙酸铵等。
2、再看化合物质谱条件是(+),则水相可加甲酸,乙酸,一般0.1%,也可以0.2%,可以是条件,原则是能浓度低就不要浓度高,(-),不要用酸,会有抑制。
3、液相分离效果,可以用不同的有机相:水相比例,是分离效果好就可以。
4、观察uv最佳吸收是多少?若离200nm很近,建议有机相用乙腈。
5、重要的是,水相不加任何物质就可楚风很好,建议不要加其他的。
6、液质联用所用的流动相,不能用不挥发性的物质,如:磷酸盐缓冲液等,常用甲酸盐,乙酸盐等易挥发的物质用作缓冲盐的首选。 在做液质联用测定生物样品时,若选择M H峰可在流动相中加入一些添加剂提供H离子,如甲酸等,一般准分子离子峰较稳定。
7、液质联用的流动相要求使用挥发性的酸碱盐,常用的如下: 酸—甲酸、乙酸(<2.0%),三氟醋酸(≤0.5%) 碱—甲胺、乙胺、三乙胺(<1.0%) 盐—醋酸铵(10-5mmol/L)。
氨基酸检测?
你若是问蛋白质,我可以直接告诉你又双缩脲试剂(中学阶段),但氨基酸的检验比蛋白质麻烦多了.一、氨基酸的分离和检测氨基酸的分离和检测手段,以往用化学分析法、层析法、比色法、气相色谱法、氨基酸自动分析仪.随着高效液相色谱及填料的发展,HPLC在氨基酸检测方面显示了其特有的优越性.但大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性,为提高分析检测灵敏度和分离选择特性,通常将氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法与柱后衍生法.HPLC与各种衍生相结合的氨基酸分析技术,构成了具有广泛适用性的现代氨基酸分析技术.x0d二、鉴定是哪种氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反应 (ninhydrin reaction) 茚三酮(弱酸环境加热) 紫色(脯氨酸、羟脯氨酸为黄色) (检验α-氨基)x0d2、坂口反应 (Sakaguchi reaction) 丙氨酸x0dα-萘酚+碱性次溴酸钠 红色 (检验胍基 精氨酸有此反应)x0d3、米隆反应(又称米伦氏反应) HgNO3+HNO3+热 红色 (检验酚基 酪氨酸有此反应,未加热则为白色)x0d4、Folin-Ciocalteau反应(酚试剂反应) 磷钨酸-磷钳酸 蓝色 (检验酚基 酪氨酸有此反应)x0d5、黄蛋白反应 浓硝酸煮沸 黄色 (检验苯环 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应)x0d6、Hopkin-Cole反应(乙醛酸反应) 加入乙醛酸混合后徐徐加入浓硫酸 乙醛与浓硫酸接触面处产生紫红色环 (检验吲哚基 色氨酸有此反应)x0d7、Ehrlich反应 P-二甲氨基苯甲醛+浓盐酸 蓝色 (检验吲哚基 色氨酸有此反应)x0d8、硝普盐试验 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 红色 (检验巯基 半胱氨酸有此反应)
检验氨基酸用什么方法?
1.茚三酮反应,氨基酸与其发生反应缩合成蓝色物质。除开脯氨酸和羟脯氨酸,他们与其反应生成黄色衍生物。
2.桑格反应,氨基酸与其反应会生成黄色的2,4-二硝基氨基酸,可以用于鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸。
3.艾德曼反应(DNFB反应),即氨基酸与苯异硫氰酸反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸。