氨基酸检测?
你若是问蛋白质,我可以直接告诉你又双缩脲试剂(中学阶段),但氨基酸的检验比蛋白质麻烦多了.一、氨基酸的分离和检测氨基酸的分离和检测手段,以往用化学分析法、层析法、比色法、气相色谱法、氨基酸自动分析仪.随着高效液相色谱及填料的发展,HPLC在氨基酸检测方面显示了其特有的优越性.但大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性,为提高分析检测灵敏度和分离选择特性,通常将氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法与柱后衍生法.HPLC与各种衍生相结合的氨基酸分析技术,构成了具有广泛适用性的现代氨基酸分析技术.x0d二、鉴定是哪种氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反应 (ninhydrin reaction) 茚三酮(弱酸环境加热) 紫色(脯氨酸、羟脯氨酸为黄色) (检验α-氨基)x0d2、坂口反应 (Sakaguchi reaction) 丙氨酸x0dα-萘酚+碱性次溴酸钠 红色 (检验胍基 精氨酸有此反应)x0d3、米隆反应(又称米伦氏反应) HgNO3+HNO3+热 红色 (检验酚基 酪氨酸有此反应,未加热则为白色)x0d4、Folin-Ciocalteau反应(酚试剂反应) 磷钨酸-磷钳酸 蓝色 (检验酚基 酪氨酸有此反应)x0d5、黄蛋白反应 浓硝酸煮沸 黄色 (检验苯环 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应)x0d6、Hopkin-Cole反应(乙醛酸反应) 加入乙醛酸混合后徐徐加入浓硫酸 乙醛与浓硫酸接触面处产生紫红色环 (检验吲哚基 色氨酸有此反应)x0d7、Ehrlich反应 P-二甲氨基苯甲醛+浓盐酸 蓝色 (检验吲哚基 色氨酸有此反应)x0d8、硝普盐试验 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 红色 (检验巯基 半胱氨酸有此反应)
pi时,氨基酸以什么形式存在’>氨基酸Ph>pi时,氨基酸以什么形式存在
氨基酸Phpi时,氨基酸主要以阴离子形式存在。
当调节某一种氨基酸溶液的pH为一定值时,该种氨基酸刚好以偶极离子形式存在,在电场中,既不向负极移动,也不向正极移动,即此时其所带的正、负电荷数相等,净电荷为零,呈电中性,此时此溶液的pH称为该氨基酸的等电点(isoelectric
point),通常用pI表示。
在等电点时,氨基酸主要以偶极离子的形式存在。
当氨基酸溶液的pH大于pI时(如加入碱),氨基酸中的一NH3+给出质子,平衡右移,这时氨基酸主要以阴离子形式存在,若在电场中,则向正极移动。
反之,当溶液的pH小于pI时(如加入酸),氨基酸中的一COO-结合质子,使平衡左移,这时氨基酸主要以阳离子形式存在,若在电场中,则向负极移动。
扩展资料
各种氨基酸由于其组成和结构的不同,而具有不同的等电点。中性氨基酸的等电点小于7,一般为5.0~6.5。酸性氨基酸的等电点为3左右。碱性氨基酸的等电为7.58~10.8。带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(eIectrophoresis,EP)。
由于各种氨基酸的相对分子质量和pI不同,在相同pH的缓冲溶液中,不同的氨基酸不仅带的电荷状况有差异,而且在电场中的泳动方向和速率也往往不同。因此,基于这种差异,可用电泳技术分离氨基酸的混合物。
例如,天冬氨酸和精氨酸的混合物置于电泳支持介质(滤纸或凝胶)中央,调节溶液的pH至6.02(为缓冲溶液)时,此时天冬氨酸(pI=2.98)带负电荷,在电场中向正极移动,而精氨酸(pI=10.76)带正电荷,向负极移动
。
参考资料来源:百度百科——氨基酸
生物体中组成蛋白质的20种氨基酸
人体20种蛋白质氨基酸在结构上的差别取决于侧链基团R的不同。通常根据R基团的化学结构或性质将20种氨基酸进行分类
根据侧链基团的极性
1、非极性氨基酸(疏水氨基酸)8种
丙氨酸(Ala)缬氨酸(Val)亮氨酸(Leu)异亮氨酸(Ile)脯氨酸(Pro)苯丙氨酸(Phe)
色氨酸(Trp)蛋氨酸(Met)
2、极性氨基酸(亲水氨基酸):
1)极性不带电荷:7种
甘氨酸(Gly)丝氨酸(Ser)苏氨酸(Thr)半胱氨酸(Cys)
酪氨酸(Tyr)天冬酰胺(Asn)谷氨酰胺(Gln)
2)极性带正电荷的氨基酸(碱性氨基酸)
3种
赖氨酸(Lys)精氨酸(Arg)组氨酸(His)
3)极性带负电荷的氨基酸(酸性氨基酸)
2种
天冬氨酸(Asp)谷氨酸(Glu)
根据氨基酸分子的化学结构
1、
脂肪族氨基酸:
丙、缬、亮、异亮、蛋、天冬、谷、赖、精、甘、丝、苏、半胱、天冬酰胺、谷氨酰胺
2、
芳香族氨基酸:苯丙氨酸、酪氨酸
3、
杂环族氨基酸:组氨酸、色氨酸
4、
杂环亚氨基酸:脯氨酸
人体内的氨基酸分为必须氨基酸和非必需氨基酸,其中:
1、必需氨基酸(essential
amino
acid):
指人体(或其它脊椎动物)不能合成或合成速度远不适应机体的需要,必需由食物蛋白供给,这些氨基酸称为必需氨基酸。成人必需氨基酸的需要量约为蛋白质需要量的20%~37%。共有10种其作用分别是:
赖氨酸:促进大脑发育,是肝及胆的组成成分,能促进脂肪代谢,调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢,防止细胞退化;
色氨酸:促进胃液及胰液的产生;
苯丙氨酸:参与消除肾及膀胱功能的损耗;
蛋氨酸(甲硫氨酸):参与组成血红蛋白、组织与血清,有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能;
苏氨酸:有转变某些氨基酸达到平衡的功能;
异亮氨酸:参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢;脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺;
亮氨酸:作用平衡异亮氨酸;
缬氨酸:作用于黄体、乳腺及卵巢。
精氨酸:精氨酸与脱氧胆酸制成的复合制剂(明诺芬)是主治梅毒、病毒性黄疸等病的有效药物。
组氨酸
人体虽能够合成精氨酸和组氨酸,但通常不能满足正常的需要,因此,又被称为半必需氨基酸。
2、非必需氨基酸(nonessentialamino
acid):指人(或其它脊椎动物)自己能由简单的前体合成,不需要从食物中获得的氨基酸。例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。
氨基酸的Pk值是什么意思?怎么用啊
等电点:如果调节溶液的PH值使得其中的氨基酸呈电中性,我们把这个PH值称为氨基酸的等电点:PI。PI是氨基酸的重要常数之一,它的意义在于,物质在PI处的溶解度最小,是分离纯化物质的重要手段。等电点的计算:对于所有的R基团不解离的氨基酸而言(即解离只发生在α-羧基和α-氨基上),计算起来非常简单:PI=(PK1’+PK2’)/2若是碰到R基团也解离的,氨基酸就有了多级解离,这个公式就不好用了,比如Lys、Glu、Cys等。aa
Cys
Asp
Glu
Lys
His
ArgPK’α-羧基
1.71
2.69
2.19
2.18
1.82
2.19PK’α-氨基
8.33
9.82
9.67
8.95
9.17
9.04PK’-R-基团
10.78(-SH)
3.86(β-COOH)
4.25(γ-
COOH)
10.53(ε-NH2)
6(咪唑基)
12.48(胍基)在这种情况下可以按下面的步骤来计算:
由PK’值判断解离顺序,总是PK1’
PK2’
PK3’
…,即谁的PK’值小,谁就先解离。
按照解离顺序正确写出解离方程式:简式,注意解离基团的正确写法。
找出呈电中性的物质,其左右PK’值的平均值就是氨基酸的等电点:PI=(PK左’+PK右’)/2以Lys为例:在黑板上用简式演示
等电点的测定:等电聚焦法:这是一种特殊的电泳,其载体上铺有连续的PH梯度的缓冲液,然后将氨基酸点样,只要该处的PH与氨基酸的PI不同,则氨基酸就会带电,PH值PI时,aa带-电;PH值PI时,aa带+电。通电后,氨基酸就会移动,直到某处的PH=PI,氨基酸才呈电中性,不再移动,因此,可以测出PI。
等电点沉淀
所有的氨基酸均为两性物质,亦即它们至少含有一个酸性基(carboxyl)及一个碱性基(α-amino)。这些可游离的团基在pH变化时,因释出或接受质子而可充当弱酸或弱碱,其离子化特性与其它物质一样遵守Henderson-Hasselbalch方程式:
pH
=
pKa
+
log10
[未质子化的形式(碱)]
/
[已质子化的形式(酸)]
即
pH
=
pKa
+
log
[A-]
/
[HA]
氨基酸可以三种形式存在,即正电荷(cation)、两性离子(zwitterion)或双极性离子(dipolar
ion)及负电荷(anion)等三种,若在酸性溶液中带正电荷,则在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一pH值下其净电荷为0,且在电场中不移动时,称此pH值为它的pI值(等电点)。因为净电荷为零,净电斥力不存在的缘故,大部份蛋白质於等电点的pH值下,其溶解度最小。相反的,当溶液的pH值低於或高於pI,所有蛋白质分子所带净电荷必为同号,彼此之间有相斥力,不会凝结。所以,将pH调到等电点的大小,则大部份的蛋白质将会沉淀,这种现象可以应用於估算某蛋白质的等电点.