磷酸化修饰位点氨基酸(找到庆大霉素生物合成最后一块“拼图”)

TIGAR与PFK-2/FBPase-2的双磷酸酶结构域具有相似性
在将TIGAR确定为骨p53靶点后，我们检查了TIGAR蛋白序列，以寻找任何可能的功能信息。利用全基因组数据库中预测的氨基酸序列，发现TIGAR与磷酸甘油酸变位酶(PGM)家族中的蛋白质有相似之处。这种相似性主要限于催化区域，在这些区域中，观察到与编码酶6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-bisphosphatase(PFK-2/FBPase-2)的四个基因(pfkfb1-4)的不同异构体产物的双磷酸酶域的相似性最高(图3A)(Okar等人，2001年)。PFK-2/FBPase-2是一种双功能酶，具有激酶和双磷酸酶活性，在该蛋白的每个亚基上的不同位点被催化。激酶结构域PFK-2位于酶的NH2末端，双磷酸酶结构域FBPase-2位于COOH末端。有趣的是，TIGAR与PFK-2/FBPase-2的相似性仅限于双磷酸酶结构域。虽然总体上TIGAR和FBPase-2之间的序列相似性相对较弱，但FBPase-2结构域中先前被确定为催化活性必不可少的区域在TIGAR中保存得很好(图3A)。这些包括构成活性位点的催化三联体的三个氨基酸(H、E和H；图3A)(Lin等人，1992年)和具有PGM家族特征的RHG签名(图3A，区域1)(Bazan等人，1989年)。虽然TIGAR与PGM家族所有成员的这些区域具有相似性，但催化三联体的第三个残基(H)周围的序列与PFK2/FBPase-2的双磷酸酶区的对应区域之间的序列比其他PGM家族成员更相似(图3A，区域2)。这些区域在不同物种的TIGAR中也是保守的(图2A)。综上所述，这些观察结果表明，TIGAR可能具有果糖二磷酸酶的功能，但不能预测与全长PFK-2/FBPase相关的任何激酶活性。
PFK-2/FBPase-2调节细胞内 果糖-2，6-二磷酸(Fru-2，6-P2)的 合成(通过PFK-2) 和
降解(通过FBPase-2)，果糖-2，6-二磷酸(Fru-2，6-P2)是6-磷酸果糖-1-激酶(PFK-1)的有效正变构效应物，可刺激糖酵解。
果糖-2，6-二磷酸(Fru-2，6-P2)也是果糖-1，6-二磷酸酶(FBPase-1)的抑制剂，FBPase-1是糖异生的调节酶。
FBPase-2的作用是降低Fu-2，6-P的水平，从而降低PFK-1的活性（糖酵解↓），增强FBPase-1的活性，从而抑制糖酵解。
为了确定TIGAR是否能够以类似于FBPase-2的方式发挥作用，我们检测了转染后瞬时或结构性过表达TIGAR的Fru-2，6-P2in细胞的水平(图3B)。这些实验表明，在TIGAR表达后，Fru-2，6-P水平出现了可重复的下降。这种下降的程度与只表达双磷酸酶结构域(FBPase-2)的截短形式的PFK-2/FBPase-2的表达情况相当(图3B)。为了评估TIGAR中与FBPase-2结构域中催化三联体的关键残基相似的三个氨基酸(H、E和H；图3A)是否是假定的双磷酸酶活性的活性位点，我们产生了TIGAR-TM突变体(三个突变体H11A/E102A/H198A)。有趣的是，这些氨基酸的突变，被证明是FBPase-2酶活性所必需的，取消了TIGAR表达降低Fr2，6-P2mRNA水平的能力(图3B)。为了建立内源性TIGAR的活性，我们检查了siRNA敲除的影响(图3C)。正如预测的那样，降低TIGAR的表达会导致Fru-2，6-P水平的升高。进一步分析表明，在过度表达TIGAR的细胞中，Fru-2，6-P2水平的降低与依赖IL-3的Pro-B
FL5.12细胞系(图3D)和人U2OS细胞(图3E)的糖酵解率降低相关。虽然这种影响不大，但与FBPase-2结构域表达后糖酵解减少的程度相似(图3e)。此外，使用siRNA抑制内源性TIGAR的表达导致糖酵解率增加(图S3)。

维生素C能治疗糖尿病吗？维生素B2能治疗偏头痛吗？维生素B6和B12能治疗H型高血压吗？

维生素C又名抗坏血酸，是人体必需的水溶性维生素，参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成。可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质（亚硝胺）生成的作用。用于维生素C缺乏症的预防及治疗，如急慢性传染病时，消耗量增加，宜适当补充。病后恢复期，创伤愈合不良者，也应适当补充。用于肝硬化、急性肝炎和砷、汞、铅、苯等慢性中毒时的肝脏损害。

控制饮食、控制血压和血脂、坚持运动、保持匀称的体型是预防糖尿病的有效方法。维生素C是一种抗氧化剂，可对抗机体内的氧化应激反应，清除氧自由基，阻止自由基破坏DNA、蛋白质和脂肪酸，有研究发现，每日摄入200mg维生素C，可以降低糖尿病的风险。鲜枣、猕猴桃、火龙果、番石榴、青椒、芥菜、菜花、大白菜、番茄等果蔬富含维生素C，是饮食补充维生素C的首选。

此外，还有研究发现，每日摄入1000mg维生素C，可改善空腹血糖、餐后血糖和糖化血红蛋白，还能降低血压和血脂，减少糖尿病并发症的风险，这可能是由于维生素C与葡萄糖具有相似的结构，可以竞争性抑制葡萄糖吸收，但是需要注意，1000mg维生素C剂量较大，无论饮食、保健品还是药物，都可能会引起不良事件，应该遵医嘱谨慎使用。

维生素B2又名核黄素，是人体必需的水溶性维生素，广泛存在于乳类、鱼类、肉类、绿叶蔬菜及谷麦中，烹饪中容易损失。维生素B2是体内黄素酶类辅基的组成部分，可参与糖、脂肪、蛋白质和核酸的代谢，促进机体的生长发育，如指甲、皮肤和毛发的正常生长，影响人体对铁的吸收，维持正常的视觉功能，并可激活维生素B6，将色氨酸转化为烟酸，可能与维持红细胞的完整性有关。适用于防治维生素B2缺乏所致的口角炎、唇干裂、舌炎、阴囊炎、角膜血管化、结膜炎、脂溢性皮炎等。

维生素B2可促进细胞内氧化-还原反应，维持线粒体的正常功能，能减少偏头痛的发作频率，用于偏头痛的预防性治疗，推荐剂量为400mg/日，宜从小剂量起始，逐步增加至最佳有效剂量。

维生素B6又名吡哆醇，是人体必需的水溶性维生素，广泛存在于肉类、全谷、蔬菜、坚果等食物中，烹饪中仅少量损失。维生素B6与ATP在体内经酶的作用转化成具有生理活性的磷酸吡哆醛和磷酸吡多胺，它是某些氨基酸的氨基转移酶、脱羧酶和消化酶的辅酶，对蛋白质、碳水化合物、脂肪的各种代谢功能起作用，如参与脑中抑制性递质γ-氨基丁酸的产生及色氨酸转化为烟酸的过程，并与白细胞、血红蛋白的生成有关。适用于防治因大量或长期服用异烟肼、肼屈嗪等引起的周围神经炎、失眠、不安，减轻抗癌药和放射治疗引起的恶心、呕吐或妊娠呕吐等，可能还有助于白细胞减少症。

维生素B12又名钴胺素，是一种含钴的红色化合物，广泛存在于动物内脏、肉类、蛋类、奶类等食物中，烹饪中会有所损失。维生素B12需转化为甲钴胺和辅酶B12后才具有活性，甲钴胺通过促进神经细胞内核酸和蛋白质以及神经髓鞘的合成，修复受损伤的周围神经。维生素B12缺乏时，可导致甲基丙二酸排泄增加和脂肪酸代谢异常，这很可能是神经系统病变的原因之一。适用于巨幼细胞贫血和多发性周围神经炎、神经痛、神经萎缩等神经系统疾病。

同型半胱氨酸是蛋氨酸的中间代谢产物，是一种毒性氨基酸，它可以引起氧化应激反应，促进血栓形成，损害血管内皮细胞，升高血脂，并可活化血管紧张素转化酶，促进血管紧张素II的产生，从而促进高血压的形成和发展，最终引起血管增生和动脉粥样硬化。H型高血压即高血压合并高同型半胱氨酸血症（Hcy≥10μmol/L），H型高血压患者脑卒中和冠心病的发病率显著增加，因此，同型半胱氨酸水平增高是发生心脑血管疾病的独立危险因素。

同型半胱氨酸在体内有两条主要代谢途径，一条代谢途径是在维生素B6和胱硫醚β-合成酶的协助下，转变为无毒的半胱氨酸，另一条代谢途径是在叶酸和维生素B12的调控下，转化为甲硫氨酸，最终通过肾脏经尿液排出体外，从而达到降低血中同型半胱氨酸的目的，因此，血液同型半胱氨酸水平升高可能反映了缺乏叶酸、维生素B6和维生素B12，叶酸是主要决定因素，而维生素B6和维生素B12是较弱的决定因素。因此，推荐高血压伴有高同型半胱氨酸血症的患者每天服用叶酸0.8mg，同时可以配合服用维生素B6 （10mg）和维生素B12（0.4mg）。#健康明星计划# #谣零零计划#