兰 岱氨基酸(两产地栗蘑多糖的含量测定研究)

两产地栗蘑多糖的含量测定研究

Y

摘要 [目的]测定并分析比较 2个不同产地的栗蘑多糖含量。[方法]采用高温高压水提 乙醇沉淀法分别提取迁西栗蘑和浙江栗蘑 多糖，并采用紫外可见分光光度计测定其含量，经苯酚一硫酸显色反应后于波长490 nm处进行测定。[结果]试验得出，迁西栗蘑多糖含量为6．54％，浙江栗蘑为3．41％。表明两地的栗蘑由于其人工栽培条件、生长环境及采摘时机等因素不同导致多糖含量具有明显的差 异。[结论]研究可为栗蘑内在质量评价以及规范化种植提供参考依据。

关键词 栗蘑；多糖 ；水提醇沉法；苯酚 一硫酸法

中图分类号 $646 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2013)15—06876—02

Determination of Polysaccharide Content in G．frondosa from Two Producing Areas

WANG Feng·chun et al (Qianxi Chestnut Industry Research Development Center，Hebei Chestnut Project Research Center，Tangshan，

Hebei 064300)

Abstract [Objective]To determine and compare polysaccharide content in Grifola frondosa from two producing areas．[Method]H J【gh tem—

perature and high pressure water extraction and alcohol precipitation method was adopted to extract polysaccharides in G．frondosa from Qianxi

and Zhejiang，UV VIS spect 0photometer was used to determine its content，and was determined at wavelength 490 nm after phenol—sulfuric

acid chromogenic reaction．[Result]Th polysaccharide content in Qianxi G．frondosa is 6．54％，and in Zhajiang G．fro,wlosa is 3．41％，in- dicating that artificial cultivation conditions，growth environment and picking time are main factors for influencing different contents of polysac—

chafide．[Conclusion]rI1}le study will provide reference basis for inner quality evaluation and normalization planting of G．frondosa．

Key words Grifola frondosa；Polysaccharide；Water extraction and alcohol precipitation method；Phenol—sulfuric acid method

栗蘑又名灰树花(Gr lafrorutosa)，日本称舞茸，是一种药食兼用的珍稀食用菌，富含多糖、氨基酸和多种矿质元素。栗蘑多糖(PGF)是栗蘑众多生物活性物质中最主要的一类活性成分，它系从栗蘑的子实体或菌丝体与发酵液中分离得到的一类富含 B．1，6-糖苷键及 岱一1，3-糖苷键的真菌多糖?，具有显著的抗肿瘤、降血脂 和调节免疫系统功能的作用 ]。研究发现，其抗癌的主要活性成分是 B一葡聚糖。但由于其野生资源缺乏，产品供不应求，近年来许多地区相继进行了栗蘑的引种驯化和试验栽培，河北省迁西和浙江省庆元等地已经实现了规模化生产 。笔者采用水提乙醇沉淀法分别提取迁西栗蘑和浙江栗蘑多糖，并采用苯酚 一硫酸法测定其含量，旨在为栗蘑的规范化种植提供参考依据。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 原材料。栗蘑由迁西县板栗产业研究发展中心收集并鉴定，分别为河北迁西栗蘑和浙江庆元栗蘑。

1．1．2 主要仪器。高压灭菌锅、电热鼓风干燥箱 DGG-9030B，上海森信实验仪器有限公司；恒温振荡器、电子天平

LT1001、紫外可见分光光度计，北京莱伯泰科仪器有限公司；移液器(1—5 rn1)。

1．1．3 主要试剂。浓硫酸(AR)，天津市翔宇化工工贸有限公司；苯酚(AR)，天津市大茂化学试剂厂；无水葡萄糖(AR)、无水乙醇(AR)，北京化学试剂。

1．2 方法

1．2．1 粟蘑多糖的提取。将自然条件下晒干的栗蘑置于干燥箱(60℃)烘3 h备用。准确称取栗蘑干品40 g置于蒸

灭菌锅中，加入1 000 ml蒸馏水浸泡2 h后将提取液倒出，再加入 1 000 ml蒸馏水加热2 h，取提取液，合并2次提取液并

用纱布过滤后置于恒温鼓风干燥箱中浓缩(120℃)，当浓缩液变稠时将温度降至 85℃恒温烘48 h，出现的深红色物质即为栗蘑粗糖肽。按上述方法将迁西栗蘑和浙江栗蘑分别做5个平行样。

1．2．2 粗糖的提纯。精密称取粗多糖0．2 g溶于5 rnl蒸馏水中，振荡3 h后过滤，滤液加入无水乙醇，振荡 2 h后离心

分离取其沉淀，该沉淀为提纯的栗蘑水溶性多糖。

1．2．3 5％苯酚试剂的配置。取苯酚加热蒸馏收集 182℃的馏分，吸取此馏分5 rnl置棕色瓶内，加入 95 rnl蒸馏水。

放冰箱备用。

1．2．4 对照品溶液的配置。葡萄糖 105℃干燥至恒重，精密称取25 mg溶于250 ml水中即得0．1 mg／ml葡萄糖溶液。

2 结果与分析

2．1 标准曲线的绘制 按表 1配制不同浓度葡萄糖溶液置于7支具塞试管中，在每支试管均准确滴加 1 ml苯酚(5％)，5 rnl浓硫酸，室温放置20 min后于490 nm波长测定吸光度。以标准葡萄糖含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表 2。标准曲线线性回归方 Y=0．008 7x+0．061 7，相关系数 r=0．999 6。表明葡萄糖浓度在 l0～80ml范围内和吸光度呈现良好的线性关系。

表1 葡萄糖溶液配置

41卷 15期 王凤眷等 两产地栗蘑多糖的含量测定研究 6877

表2 栗蘑多糖标准曲线

2．2 多糖含量的比较 采用苯酚 一硫酸法测定多糖的含量。将经过提纯的栗蘑多糖溶于25 ml蒸馏水中，制成溶液。精确移取0．02 ml于试管中，加蒸馏水至 1 rnl，再加入 1 ml浓度为5％的苯酚溶液，然后加入 5 IIl1浓硫酸，混匀后放置 20min冷却至室温。在490 nm波长下测定吸光度，结果得出，迁西栗蘑多糖平均含量为6．54％，浙江栗蘑多糖平均含量为

3．41％(表 3、4)。

表3 迁西栗蘑的多糖含量

图5 不同热处理后真空干燥处理对香菇中甲醛含量的影响程中的甲醛含量变化具有重要的意义。该研究发现，干燥方

式的不同对香菇中甲醛有明显影响：香菇干燥后其甲醛含量均有明显升高，干制过程中，前期升温慢，甲醛含量升得也慢；一MU期升温快，香菇中甲醛含量升得也快，但其甲醛的含量均符合300 mg／kg的要求 。为了减少干香菇中甲醛含量，在对鲜香菇进行干燥前，先进行钝化酶的热处理再进行干燥

3 结论与讨论

采用高温高压水浸提 一乙醇沉淀法分别提取迁西栗蘑多糖和浙江栗蘑多糖，并采用苯酚 一硫酸法测定了多糖的含量。栗蘑多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物且颜色稳定，此溶液在490 nm波长处有特征吸收，可测多糖含量，结果准确，重现性好。以栗蘑有效成分之一粟蘑水溶性多糖作为栗蘑的品质标准进行了测定和比较。试验结果表明，迁西栗蘑和浙江栗蘑由于其人工栽培条件和生长环境的不同等因素，导致多糖含量具有明显的差异。迁西栗蘑多糖含量较高的原因在于采摘期早，栗蘑孢子未弹射出菇体，主要药用成分充足，就像是麦粒谷粒没有脱落一样。所以为保持较好的质量必须适时采摘。因为栗蘑属于多孔菌类，灰栗蘑将成熟时，在菌盖的背面和菌柄分枝的侧面，都会长出密密的管状菌孔即多孔现象。多孔现象刚开始出现，即为采收的最佳时期。这时，子实体的个体不会再长大，而且营养含量高；如果多孔现象非常明显，菌孔已经长大了，说明栗蘑已经老化，营养含量较低，品质较差 。

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效果较好，而从干燥方式来看，显然真空干燥优于热风干燥。

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