氨基酸常温

植物组织游离脯氨酸含量的测定实验报告

脯氨酸是一种环状的亚氨基酸，通常所说的脯氨酸就是L-脯氨酸，天然存在的一种氨基酸，常温下本品为柱状晶体。加热下到215-220℃ 迅速分解。能溶于热水和乙醇。今天就给大家分享一下如何通过分光光度计测定植物中脯氨酸的含量。

一、试剂

所有试剂除注明者外，均为分析纯。

1.1 磺基水杨酸：0.6克磺基水杨酸，定容至200ml

1.2 酸性茚三酮（现配）：3.75克茚三酮+90ml冰醋酸+36ml蒸馏水

1.3 甲苯

1.4 脯氨酸标准贮备液：在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯中内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100ug。

二、主要仪器

万分之一分析天平、水浴锅、分光光度计

三、试样的制备

取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放入4℃冷藏备用。

四、分析步骤

4.1 试样溶液准备

称取鲜样0.3g，加入5ml磺基水杨酸，加盖，沸水浴10分钟，过滤，吸取滤液2ml，加2ml冰醋酸和3ml酸性茚三酮，沸水浴40分钟，冷却，加入5ml甲苯，充分振荡，静止分层，取上层甲苯溶液于比色皿中，520nm下比色。

4.2 空白溶液制备

除不加试样外，应用的试剂和操作步骤同4.1

4.3 标准曲线绘制

吸取脯氨酸标准溶液,0、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml和3ml用蒸馏水定容至50ml容量瓶中，摇匀，各瓶中脯氨酸的浓度分别为0、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml的系列标准浓度溶液，取7只试管分别取系列标准浓度的脯氨酸2ml，除不加试样外，其余操作步骤同4.1

五、结果计算

脯氨酸含量（%）=【C×V/（W×Vt×106）】×100

式中：

C–为从校准曲线或回归方程求得的2ml测定液中脯氨酸含量，ug/2ml

V–为提取液体积，ml；

W–为称取试样鲜重的质量，g；

Vt–为测量液体积，ml；

106、100–为换算因数。

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来源：栢晖生物整理。

植物中脯氨酸的测定（分光光度计）,植物组织游离脯氨酸含量的测定实验报告